( 場(chǎng)景恐懼實(shí)驗(yàn))條件恐懼訓(xùn)練對(duì)大鼠行為活動(dòng)的影響

摘要：目的 誘導(dǎo)焦慮反應(yīng)模型,觀察焦慮反應(yīng)對(duì)大鼠行為活動(dòng)的影響。方法 條件恐懼訓(xùn)練,行為檢測(cè)。結(jié)果 連續(xù)4d的條件恐懼訓(xùn)練后,與對(duì)照組相比, F344大鼠在木僵行為實(shí)驗(yàn)中木僵反應(yīng)增多884%( P<0. 001) ,小范圍探究運(yùn)動(dòng)減少88%( P<0. 001);在高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)中,進(jìn)入開放壁的次數(shù)和在開放壁停留時(shí)間分別減少75%( P<0. 001)和86%( P<0. 001);在開野實(shí)驗(yàn)中,踩格子數(shù)和在中央格停留時(shí)間分別減少47%( P<0. 001)和60%( P<0. 05)。結(jié)論條件恐懼訓(xùn)練使大鼠焦慮反應(yīng)增強(qiáng),探究活動(dòng)能力下降,它是一種誘導(dǎo)焦慮反應(yīng)模型較理想的方法。

關(guān)鍵詞：恐懼; 條件反射; 焦慮; F344大鼠

由于與焦慮情緒有關(guān)的腦區(qū)定位尚未明確,又缺乏有效的動(dòng)物模型,因此目前國(guó)內(nèi)這方面的基礎(chǔ)研究報(bào)道甚少。Davis發(fā)現(xiàn)通過(guò)條件反射性恐懼訓(xùn)練的動(dòng)物,其行為表現(xiàn)與臨床上焦慮癥患者的癥狀和體征很相似。目前條件性恐懼(conditionedfear)訓(xùn)練已經(jīng)成為一種經(jīng)典的誘導(dǎo)焦慮反應(yīng)模型的方法,被國(guó)外學(xué)者廣泛采用。本實(shí)驗(yàn)采用這種方法來(lái)誘導(dǎo)大鼠焦慮反應(yīng)模型,觀察條件恐懼訓(xùn)練對(duì)大鼠行為活動(dòng)的影響。

材料與方法

一、動(dòng)物及分組

純種雄性近交系F344大鼠(購(gòu)自上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心),體質(zhì)量200～250g,隨機(jī)分組,每組10只,每只大鼠均置于有機(jī)玻璃圓筒內(nèi)單獨(dú)飼養(yǎng),活動(dòng)不受限制,自由攝食飲水, 12h明/12h暗,室溫(22±2)℃。

二、儀器與材料

SEN23201型電刺激器,日本NihonKohden公司產(chǎn),連接一電擊籠(40cm×40cm×50cm),用于產(chǎn)生電刺激,電擊籠壁由有機(jī)玻璃構(gòu)成,籠底由不銹鋼鋼絲構(gòu)成,間距1. 2cm;低頻信號(hào)發(fā)生器,江西電子儀器廠產(chǎn),連接一揚(yáng)聲器上,用于產(chǎn)生相應(yīng)規(guī)格的聲音。
 型號(hào)：XR-XC404,上海欣軟信息科技有限公司

三、動(dòng)物模型制備

采取電擊大鼠足底產(chǎn)生條件性恐懼的方法,制造焦慮動(dòng)物模型。提示性恐懼條件反射(cur fear condi2tioning)訓(xùn)練組:將大鼠置于電擊籠內(nèi),電擊前先由揚(yáng)聲器發(fā)出噪聲(75dB; 1000Hz; 5s),在噪聲持續(xù)的*后0. 5s內(nèi)加以電擊(0. 5mA; 0. 5s),每分鐘1次,共15次,連續(xù)訓(xùn)練4d。對(duì)照組:大鼠置于電擊籠內(nèi),只有噪聲而無(wú)電擊,其他條件同訓(xùn)練組。

四、行為檢測(cè)

(一)木僵行為(FreezingBehavior)實(shí)驗(yàn):*后一次訓(xùn)練結(jié)束48h后觀察條件刺激(噪聲)引起的木僵行為。主要指標(biāo)有: (1)木僵:保持固定體位不動(dòng)(除了心跳和呼吸); (2)小范圍探究運(yùn)動(dòng):僅軀體和前肢作探究性運(yùn)動(dòng); (3)活動(dòng):后肢活動(dòng),理毛、站立。(二)高架十字迷宮(elevatedplusmaze):觀察記錄5min內(nèi)活動(dòng)的情況,觀察指標(biāo): (1)閉合臂進(jìn)入次數(shù)(必須有兩只前爪進(jìn)入臂內(nèi)); (2)開放臂進(jìn)入次數(shù); (3)閉合臂停留時(shí)間; (4)開放臂停留時(shí)間。(三)開野實(shí)驗(yàn)(openfieldmethod):木制箱100cm×100cm×50cm,地板用筆劃成25方格20cm×20cm,沿墻格稱外周格,其余為中央格。將動(dòng)物放在正中央格,觀察12min內(nèi)活動(dòng)情況。觀察指標(biāo)(1)方格間穿行次數(shù):三爪以上跨入鄰格的次數(shù); (2)豎起或修飾次數(shù):兩前肢離地1cm以上的次數(shù); (3)中央格停留時(shí)間。后兩個(gè)實(shí)驗(yàn)在*后一次訓(xùn)練結(jié)束24h后進(jìn)行。

五、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS10. 0統(tǒng)計(jì)軟件分析,均用x±s表示。兩組間均數(shù)的比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。

結(jié) 果

一、條件恐懼訓(xùn)練對(duì)F344大鼠木僵行為實(shí)驗(yàn)各指標(biāo)的影響

與對(duì)照組相比,訓(xùn)練組大鼠條件恐懼訓(xùn)練后木僵反應(yīng)(freezingresponse)增加884%( P<0. 001),小范圍探究運(yùn)動(dòng)減少88%( P<0. 001),無(wú)活動(dòng)行為的表現(xiàn)。

二、條件恐懼訓(xùn)練對(duì)F344大鼠高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)各指標(biāo)的影響

與對(duì)照組相比,訓(xùn)練組大鼠進(jìn)入開發(fā)壁次數(shù)減少75%( P<0. 001),在開發(fā)壁停留時(shí)間減少86%( P<0. 001),進(jìn)入閉合壁次數(shù)增多,在閉合壁停留時(shí)間增加,但這兩項(xiàng)都不成顯著性差異。

三、條件恐懼訓(xùn)練對(duì)F344大鼠開野實(shí)驗(yàn)各指標(biāo)的影響

與對(duì)照組相比,訓(xùn)練組大鼠踩格子數(shù)減少47%( P<0. 001),中央格停留時(shí)間減少60%( P<0. 05),修飾次數(shù)未有顯著性改變。

討 論

臨床上焦慮癥包括廣泛性焦慮及發(fā)作性驚恐兩種狀態(tài),該類患者主要表現(xiàn)為過(guò)分焦慮、恐懼、行為逃避、易覺醒等一系列癥狀。實(shí)際上焦慮與恐懼是緊密相聯(lián)的,恐懼與具體的刺激有關(guān),而焦慮則是更加泛化的一個(gè)概念。我們選擇這種近交系F344大鼠,通過(guò)條件恐懼訓(xùn)練誘導(dǎo)焦慮反應(yīng)模型,旨在觀察焦慮反應(yīng)對(duì)大鼠行為活動(dòng)的影響。對(duì)嚙齒類動(dòng)物而言,木僵反應(yīng)被認(rèn)為是一種反映恐懼或焦慮的可靠指標(biāo)。 F344大鼠經(jīng)明確提示性條件恐懼訓(xùn)練后木僵反應(yīng)顯著性增加,小范圍探究運(yùn)動(dòng)及活動(dòng)顯著減少。這說(shuō)明通過(guò)將條件刺激(聲音)和非條件刺激(電擊足底)之間反復(fù)多次建立聯(lián)系,恐懼性條件反射已經(jīng)成立, F344大鼠表現(xiàn)出一種很強(qiáng)的恐懼反應(yīng)。高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)可用來(lái)評(píng)價(jià)大鼠的焦慮情緒。Montgomer認(rèn)為將大鼠放入高架十字迷宮時(shí),面對(duì)新奇刺激,大鼠同時(shí)產(chǎn)生探究的沖動(dòng)與恐懼,這就造成了探究-回避的沖突行為,從而產(chǎn)生焦慮。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知,條件性恐懼訓(xùn)練后大鼠顯著性減少進(jìn)入開放壁的次數(shù)及在開放壁停留時(shí)間,另外根據(jù)我們的觀察,大鼠在閉合壁內(nèi)表現(xiàn)出更多與焦慮相關(guān)的行為,如僵住不動(dòng),排便等,這都說(shuō)明經(jīng)明確提示性條件反射恐懼訓(xùn)練后的F344大鼠明顯進(jìn)入焦慮狀態(tài)。開野實(shí)驗(yàn)可反映大鼠探究活動(dòng)及情緒反應(yīng)。條件恐懼訓(xùn)練后大鼠踩格子數(shù)及在中央格停留時(shí)間都顯著減少,說(shuō)明大鼠的探究活動(dòng)下降,這正模擬了臨床上焦慮癥患者行為逃避、探索行為能力下降這一表現(xiàn)。綜上所述,條件恐懼訓(xùn)練是誘導(dǎo)焦慮反應(yīng)模型的一種理想方法,然而本實(shí)驗(yàn)僅就焦慮反應(yīng)對(duì)大鼠行為活動(dòng)的影響作了初步探討,有關(guān)焦慮癥的發(fā)病機(jī)制有待進(jìn)一步研究。